AIDS wird anhand einer Blutuntersuchung diagnostiziert, allerdings sind die Antikörper der HIV-Infektion frühstens drei Monate nach der Ansteckung feststellbar. Die Untersuchung auf Aids wird nicht grundsätzlich im Rahmen von Routineuntersuchungen durchgeführt, lediglich bei einer Schwangerschaft wird die werdende Mutter auf HIV-Antikörper getestet.
Zur sicheren Diagnose von AIDS werden drei Bluttests im Abstand von mehreren Wochen benötigt. Zunächst wird ein sogenannter ELISA-Test durchgeführt, ein einfacher Test auf vorhandene Antikörper im Blut. Zeigt dieser Test ein positives Ergebnis an, ist die Diagnose Aids noch nicht endgültig gesichert. Es erfolgt ein zweiter Bluttest und selbst ein zweites, positives Ergebnis sichert die Diagnose noch nicht vollständig. Erst nach Abschluss des dritten, sogenannten Western Blot-Tests wird bei einem dritten, positiven Ergebnis die Diagnose HIV-positiv gestellt.
Nach der Diagnosestellung erfolgen weitere Untersuchungen um das Stadium der Erkrankung festzulegen. Besonders wichtig ist die Ermittlung der vorhandenen HI-Viren im Blut des Betroffenen, denn anhand dieser Menge ist es dem Arzt möglich, eine Prognose über den Krankheitsverlauf zu stellen. Sind sehr viele HI-Viren vorhanden, ist die Prognose für den Patienten meist schlechter, da die Immunzellen des menschlichen Körpers schneller angegriffen und zerstört werden können.
Die Diagnose AIDS ist für den Betroffenen in der Regel ein Schock, die meisten Patienten haben mit diesem Ergebnis nicht gerechnet und haben möglicherweise kein genaues Bild darüber, was diese Diagnose bedeutet. Für Menschen in einer Partnerschaft ist es nach der Diagnose sehr wichtig, dass der Partner darüber informiert wird. Insbesondere wenn vor der Diagnosestellung ungeschützter Geschlechtsverkehr praktiziert wurde, ist eine sofortige Untersuchung des Partners notwendig, um eine eventuelle Ansteckung festzustellen. Nicht jeder ungeschützte Geschlechtsakt führt zwangsläufig zur Ansteckung, aber wenn feststeht das der Partner an Aids erkrankt ist, sollte in der Zukunft ausschließlich Safer Sex praktiziert werden, falls sicher der Partner vorher noch nicht infiziert hat.